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熒光顯微鏡濾光片簡(jiǎn)介

2024-09-09 派大莘

熒光顯微鏡濾光片是熒光顯微鏡系統中的重要組件,其主要功能是選擇性地透過(guò)或反射激發(fā)光和熒光光之間的波長(cháng)差異。這些濾光片可以顯著(zhù)提高圖像的對比度和清晰度,使得研究者能夠更準確地觀(guān)察和分析樣品。


 熒光顯微鏡濾光片簡(jiǎn)介


無(wú)論用什么顯微鏡,要得到準確的實(shí)驗結果和實(shí)驗數據,都離不開(kāi)熒光染料正確設置激發(fā)和發(fā)射波長(cháng),熒光染料所需的激發(fā)光和釋放的熒光都是特定波長(cháng)的,所以需要利用各種濾色片來(lái)選擇性的透過(guò)某種特定波長(cháng)的光來(lái)實(shí)現熒光觀(guān)察。否則就會(huì )出現激發(fā)不了,或者激發(fā)了卻看不到或串色的現象。所以選擇合適的濾色片至關(guān)重要!


 熒光顯微鏡


顯微鏡觀(guān)察的熒光一般包括紫外、紫藍綠色光兩種色光,常見(jiàn)的濾光片類(lèi)型為長(cháng)波濾光片或帶通濾光片,在熒光顯微鏡的光學(xué)組件中,涉及光學(xué)鏡片一般分為激發(fā)濾光片、分色鏡(也叫二向色鏡)、發(fā)射濾光片,激發(fā)濾光片負責可通過(guò)的激發(fā)熒光波長(cháng)激發(fā),分色鏡負責精確傳遞小范圍顏色光同時(shí)反射激發(fā)光,一般而言,激發(fā)光波長(cháng)短于發(fā)射光波長(cháng),反射濾光片通過(guò)反射光阻擋其他雜散光和激發(fā)光的反射光,進(jìn)而透射到人眼。

 熒光顯微鏡光學(xué)系統

按功能分:

激發(fā)濾光片(Excitation Filter):選擇性地透過(guò)激發(fā)光的波長(cháng)范圍,通常是藍色或紫色。其作用是激發(fā)樣品中的熒光染料,使其產(chǎn)生熒光信號。常見(jiàn)的激發(fā)濾光片波長(cháng)范圍在400-500 nm之間。

二向色鏡(Dichroic Mirror):選擇性地反射激發(fā)光的波長(cháng),同時(shí)透過(guò)樣品發(fā)出的熒光光信號。二向色鏡濾光片的波長(cháng)范圍通常在500-550 nm之間。

發(fā)射濾光片(Emission Filter):選擇性地透過(guò)樣品發(fā)出的熒光光信號,同時(shí)阻擋非特異性的背景熒光。發(fā)射濾光片的波長(cháng)范圍取決于所使用的熒光染料。

 熒光顯微鏡光學(xué)系統工作原理

 

熒光顯微鏡中各個(gè)波段的所需濾光片的發(fā)射波長(cháng)和激發(fā)波長(cháng)參考

品名

紫外激發(fā)組

藍色激發(fā)組

CFP激發(fā)組

YFP激發(fā)組

綠色激發(fā)組

TexasRed激發(fā)組

激發(fā)片

360/50nm

475/35nm

442/20nm

490/20nm

530/40nm

560/30nm

分光片

400nm

500nm

460nm

510nm

560nm

590nm

發(fā)射片

450/60nm

530/50nm

480/30nm

530/25nm

605/60nm

630/70nm

 

 

熒光顯微鏡濾光片通??梢园凑詹煌姆诸?lèi)方式進(jìn)行劃分:

按使用目的分:

通用型:適用于觀(guān)察細胞、細菌、病毒等一般生物樣品。

專(zhuān)用型:針對特定研究需求設計,如研究生物大分子結構。

科研用:具備更高的精度和靈敏度,適用于深入的科學(xué)研究。

 

按材料分:

石英玻璃:具有優(yōu)異的光學(xué)性能和穩定性。

硅酸鹽玻璃:成本較低,但光學(xué)性能略遜于石英玻璃。

氟化物玻璃:在某些特定波長(cháng)范圍內具有出色的透過(guò)性。

 

選擇與應用

在選擇熒光顯微鏡濾光片時(shí),需要考慮以下幾個(gè)因素:

熒光染料的發(fā)射波長(cháng):濾光片的波長(cháng)范圍應與熒光染料的發(fā)射波長(cháng)相匹配,以確保最佳的熒光信號檢測效果。

研究目的:不同的研究目的可能需要不同類(lèi)型的濾光片組合。例如,對于高靈敏度的檢測任務(wù),可能需要選擇具有更高截止深度和更窄帶寬的濾光片。

顯微鏡類(lèi)型:不同類(lèi)型的熒光顯微鏡(如透射式、落射式等)可能需要不同的濾光片配置。

在實(shí)際應用中,需要根據具體情況合理選擇和搭配濾光片。例如,在透射熒光顯微鏡中,濾光片的順序通常為吸熱濾光片、激發(fā)濾光片組合、被檢標本和阻擋濾光片。而在落射熒光顯微鏡中,則需要在激發(fā)濾光片和被檢標本之間加入色光分離反射濾光片。

 

價(jià)格與供應

熒光顯微鏡濾光片的價(jià)格因品牌、型號、規格和供應商而異。市場(chǎng)上存在多種品牌和型號的濾光片供選擇,價(jià)格從幾元到幾百元不等。在購買(mǎi)時(shí),建議根據實(shí)際需求和預算進(jìn)行選擇,并選擇信譽(yù)良好的供應商進(jìn)行采購。

綜上所述,熒光顯微鏡濾光片是熒光顯微鏡系統中不可或缺的重要組件。通過(guò)合理選擇和搭配濾光片,可以顯著(zhù)提高熒光顯微鏡的成像效果和研究效率。